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詳細解讀大鼠檢測試劑盒的實驗步驟

點擊次數:168發布時間:2021-12-04
 
  大鼠檢測試劑盒運用雙抗體夾心ELISA法定量測定大鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體中GnRHR含量。
 
  大鼠檢測試劑盒的實驗步驟:
 
  一、準備好試劑與儀器:
 
  磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
 
  二、實驗步驟
 
  1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
 
  2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其完全覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
 
  3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
 
  4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
 
  5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
 
  大鼠檢測試劑盒的注意事項:
 
 ?、俚渭?.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
 
 ?、贛er(348E6)MousemAb滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其完全覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。
 
 ?、廴〕霾F?,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5min,不時振蕩。
 
 ?、苋〕霾F?,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
 
 ?、萘⒓从脽晒怙@微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+”表示:
 
  (-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++--++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。
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